免疫沉淀 (Immunoprecipitation,IP) 是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與ProteinA/G偶聯的agarose或Sepharose珠子孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復合物,沉淀經過洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
圖1.IP原理及流程
在免疫沉淀實驗后的WB驗證環節中,當使用常規的 Anti-IgG (H+L) 酶標二抗時,通常會出現對應免疫沉淀一抗變性后產生的重鏈(50kDa)和輕鏈(25kDa)兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在此附近時,就會受到這兩條帶的干擾。
圖2.傳統二抗WB驗證IP,重鏈輕鏈干擾
那么如何避免避免IP檢測過程中的重、輕鏈干擾,達科為可為您提供兩種解決方案:
方案一:WB抗體和IP抗體選擇不同種屬
方案二:選擇只識別天然二硫鍵構象的二抗
Rockland TrueBlot?二抗,是一系列單克隆二抗,與傳統二抗不同的是,TrueBlot?二抗只識別天然二硫鍵的IgG,而不識別被還原打開的二硫鍵,因此可以消除IP檢測過程中變性抗體重鏈和輕鏈的影響。
圖3.Rockland TrueBlot?二抗vs 傳統二抗
TrueBlot?系列產品注意事項
1. TrueBlot?產品適用的前提:當IP抗體與WB一抗同源。
2. Rabbit TrueBlot?不能與Protein A/G結合的Beads一起用。推薦TrueBlot?配套的Beads。
3. 非IP驗證的WB實驗也可使用TrueBlot?系列產品避免重鏈和輕鏈的影響。
促銷活動
促銷活動活動范圍:Rockland全系列二抗(包括TrueBlot?系列二抗)
活動內容:請咨詢當地業務員
活動時間:即日起到9.30日
活動代碼:DIST-Q3CNSEC
Rockland熱賣TrueBlot?產品列表
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