首先安利一下Epicentre的專利技術——CopyControl?克隆系統,能夠讓您共享單拷貝和高拷貝的優點。CopyControl?克隆:首先以單拷貝形式生長,單拷貝可以確保插入穩定及成功克隆編碼基因序列;在需要的時候,通過誘導液誘導成高拷貝克隆,以便下游應用所需。這一系統可以用來構建PCR克隆,對于BAC,Fosmid文庫等大型質粒格外有用。
CopyControl?克隆系統有兩個重要成分,相輔相成,缺一不可:
1.CopyControl? pCC1和pCC2載體
pCC1和pCC2載體含有兩個復制起始位點:單拷貝的大腸桿菌F-因子復制子和誘導型的高拷貝oriV。其中OriV的啟動,需要trfA基因產物,由CopyControl?的另一個重要成分——TransforMax? EPI300 E.coli菌株提供。
圖1 pCC1載體圖譜
2.TransforMax? EPI300 E.coli
這是一種工程菌株,含有受誘導啟動子控制的trfA基因,在誘導的條件下可以提供啟動oriV所需要的trfA基因產物。
圖2 TransforMax? EPI300 E.coli菌株基因型
CopyControl?克隆誘導步驟
圖3 CopyControl?克隆流程
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