這一期和大家介紹一下轉座酶。需要詳細了解的小伙伴們,趕快來看一下吧!
1983年,諾貝爾生理學或醫學獎頒給了81歲的美國遺傳學家巴巴拉-麥克林托克,因為她提出了“移動的控制基因學說”。麥克林托克先發現玉米中有的單個基因是能跳躍的,即從染色體的一個位置跳到另一個位置,甚至從一條染色體跳到另一條染色體上。這種會“跳躍”的基因就是“轉座因子”,目前通稱“轉座子”(transposon)。
轉座子是自然發生的遺傳因子,最先在玉米中被發現,之后在細菌、真菌及動植物中也都有發現。如玉米的Ac/Ds、Spm/En類及金魚草的Tam類轉座子,果蠅的P因子,來源于鱗翅目昆蟲的piggyBac轉座子等。
轉座子通過轉錄或逆轉錄方式,在內切酶的幫助下,在生物染色體間移動。目前,已知轉座子主要通過兩種方式進行轉座:復制型轉座和非復制型轉座。
復制型轉座即是在轉座時,先將轉座子DNA轉錄形成RNA中間產物,再逆轉錄形成新的相同的DNA,新形成的轉座子DNA移動到其他新位置,而原來的轉座子仍保留在原來位置,這個過程需要轉座酶和解離酶的參與;而非復制型轉座則直接從原來的位置切除下來并轉移到新的位置,整個過程不會形成RNA中間產物,只需要轉座酶的參與。
EZ-Tn5轉座子可在體外插入到含有靶DNA的載體。當EZ-Tn5轉座子在沒有鎂離子孵育時,形成穩定的EZ-Tn5轉座體復合體,可以被電擊進入活細胞,一旦進入細胞中,轉座體由細胞內鎂離子活化,就能隨機插入到宿主的基因組DNA中。
圖1. EZ-Tn5轉座子插入(體外/體內)
Lucigen提供的EZ-Tn5轉座酶是Tn5轉座酶的高活性突變形式,是一種高效酶,用于在體外將EZ-Tn5轉座子插入到任何目標DNA中。
參考文獻
Van Hoang, K. el al.(2011) Applied and Environmental Microbiology 77, 2309-2316.
Hartmann, I, et al. (2010) Applied and Environmental Microbiology 76: 2251-2261.
Langridge, et al. (2009) Genome Research 19: 2308-2316.
產品信息
美國Lucigen公司成立于1998年,提供各類用于分子生物學相關產品,可以使研究者成功克隆較難克隆的基因,其在2016年收購了Illumina旗下Epicentre產品線。目前產品類別主要包括:體外轉錄、基因克隆(BAC克隆試劑盒)、感受態細胞(TG1噬菌體文庫構建感受態)、體外擴增、轉座子突變、蛋白表達、文庫構建等。
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