還記得小編之前給大家介紹Strep-tag? 系統(tǒng)的發(fā)展由來嗎?IBA新推出的第三代Strep-tag?系統(tǒng),以其極高的親和力、極高的蛋白純度、極簡的操作步驟等優(yōu)勢,越來越受到廣大科研伙伴們的青睞!
為了讓大家更好的體驗該純化體系,小編準備了暖心套裝小禮品哦~
好禮相送
即日起至6月15日,凡購買Strep-Tactin?XT系列純化/蛋白固定產品,即可免費獲得以下小禮物(二選一):
基本Buffer組(2-9997-001),內含
蛋白檢測組(2-9997-002),內含
1x Buffer W, 120 ml
Strep-Tactin?-HRP conjugate, 20 μg
1x Buffer BXT, 25 ml
Control protein GFP-Strep-tag, 30 μg
純化步驟更精簡
Strep-tag? 系統(tǒng)純化流程精簡,省去測試不同條件的時間
在所有緩沖液都已準備好的情況下,His-tag 與 Strep-tag? 系統(tǒng)皆為一步純化。但不同于 Strep-tag? 的是,使用 His-tag 系統(tǒng)時,常需先對純化不同目的蛋白所需的咪唑 (Imidazole) 溶液濃度及含鹽量進行測試。下表為兩個系統(tǒng)的標準純化步驟:
純化流程 |
第三代 Strep-tag? 系統(tǒng) |
His-tag 系統(tǒng) |
平衡柱子 |
2 CV Buffer W |
2 CV Ni-NTA Lysis Buffer |
加入蛋白提取液 |
在上樣前,為移除可能產生的沉淀物,凍存的細胞提取液需先離心一次(18000 xg,5 min,4°C) |
|
沖洗純化柱 |
5x 1 CV Buffer W |
2x 4 CV Ni-NTA Wash Buffer |
洗脫蛋白 |
6 x 0.5 CV Buffer BXT |
4 x 0.5 CV Ni-NTA Elution Buffer |
再生/保存柱子 |
4 CV 10 mM NaOH |
0.5 M NaOH for 30 mins |
* His-tag系統(tǒng):參考生產商batch純化流程
另外值得一提的是,Strep-tag? 系統(tǒng)能與許多表面活性劑、還原劑和螯合劑兼容,是一個非常有彈性的系統(tǒng)。若目的蛋白為金屬蛋白或膜蛋白,也可以將緩沖液中的EDTA去除,并且不會影響 Strep-Tactin?XT的效果。具體兼容試劑可見下表。
試劑 |
耐受濃度(測量值,不代表最高值) |
DTT |
45 mM |
β-Mercaptoetanol |
45 mM |
EDTA |
50 mM |
Imidazole |
250 mM |
NaCl |
4.5 M |
Urea |
6 M |
更詳細的相關試劑表請看,底部閱讀原文。
純化結果一較高低
由上表可知,Strep-tag? 系統(tǒng)的純化流程簡便,但純化效果不打折扣。下圖測試了幾種不同的蛋白在天然狀態(tài)下的純化,純度皆在95%以上。除此之外,在變性條件中純化目的蛋白亦沒問題,純度仍遠高于使用His-tag系統(tǒng)。
在native條件下,純化mCherry及GAPDH蛋白的結果
His-tag 系統(tǒng)(左)與第三代 Strep-tag? 系統(tǒng)(右)
以SDS-PAGE分析發(fā)現,不管是mCherry或是GAPDH,使用Strep-tactin? XT: Twin-Strep-tag?都能得到純度較高的目標蛋白(見Elution)。Western Blot分析結果顯示,提取mCherry所出現的雜質為其降解產物。
在變性條件下,純化不同蛋白的結果
以SDS-PAGE分析發(fā)現,使用第三代Strep-tactin?XT能在使用6M尿素的變性條件下,得到大量高純度的蛋白;使用Strep-tactin?(4M尿素)得到蛋白量較少。而使用Ni-NTA雖然能在將pH值調降至4.5(E2)情況下,純化出靶蛋白,但得到的最終產物仍含有許多雜質。
適用范圍廣
蛋白類型
因His-tag系統(tǒng)使用Ni離子,所以在純化金屬蛋白(多數為酶)時,可能會受到金屬間交互作用的干擾。而使用Strep-tag? 則不會出現此問題,因為Strep-Tactin? XT與Strep-tag?的特異性結合不受金屬離子影響。且因其溫和的純化流程,所以還能用于純化大型蛋白、多亞基的蛋白復合體或是跨膜蛋白,并且保持蛋白功能。以Strep-tag?系統(tǒng)純化出不同的蛋白實例如下:
宿主細胞類型
依據研究項目的不同,各實驗室使用不同的表達系統(tǒng),常用的有大腸桿菌、哺乳動物細胞、酵母、昆蟲細胞或是植物細胞等。如果使用哺乳動物細胞來表達目的蛋白,His-tag就不適合,因為系統(tǒng)中的組氨酸會干擾其純化效果。而Strep-tag?系統(tǒng)則與這些表達系統(tǒng)都能互相搭配。請見下圖實驗數據:
* 單一條帶為純化出來的目標蛋白
除了用來生產高純度的蛋白,Strep-Tactin? XT與Twin-Strep-tag?間的高親和力更能用來穩(wěn)定的固定目標蛋白,以進行蛋白質檢測,例如SPR分析。以往為了增進目標蛋白的純度,或進行下游分析,常常研究一個蛋白需要使用好幾個不同的標簽。現在有了 Strep-tag?這個多功能的親和標簽系統(tǒng),讓您的蛋白研究從克隆到分析一步到位。
Strep-Tactin? XT 系列產品
名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 網站報價 |
Strep-Tactin? XT Superflow? 50 % suspension | 2-4010-002; | 4 ml; | ¥1365; |
2-4010-010; | 20 ml; | ¥4814; | |
2-4010-025 | 50 ml | ¥11,437 | |
Strep-Tactin? XT Superflow? gravity flow columns | 2-4011-005; | 5×0.2 ml; | ¥2361; |
2-4012-001; | 1 ml; | ¥1012; | |
2-4013-001; | 5 ml; | ¥3051; | |
2-4014-001 | 10 ml | ¥5,734 | |
Strep-Tactin? XT Superflow? cartridges (for ?kta/peristaltic pumps) | 2-4021-001; | 1 ml; | ¥1181; |
2-4022-001 | 5 ml | ¥3,051 | |
Strep-Tactin? XT Superflow? high capacity 50 % suspension | 2-4030-002; | 4 ml; | ¥1824; |
2-4030-010; | 20 ml; | ¥6562; | |
2-4030-025 | 50 ml | ¥15,178 | |
Strep-Tactin? XT Superflow? high capacity gravity flow columns | 2-4031-005; | 5×0.2 ml; | ¥3051; |
2-4032-001; | 1 ml; | ¥1365; | |
2-4033-001; | 5 ml; | ¥4186; | |
2-4034-001 | 10 ml | ¥7,880 | |
Strep-Tactin? XT Superflow? high capacity cartridges (for ?kta/peristaltic pumps) | 2-4025-001; | 1 ml; | ¥1518; |
2-4026-001 | 5 ml | ¥4,431 | |
MagStrep "type3" XT beads 5% suspension | 2-4090-002 | 2 ml | ¥2,724 |
Strep-Tactin? XT Spin Column Kit | 2-4151-000 | 1 kit | ¥2,300 |
Strep-Tactin? XT immobilization plate | 2-4101-001 | 1 plate | ¥796 |
Twin-Strep-tag? Capture Kit | 2-4370-000 | 1 kit | 請咨詢 |
IBA品牌介紹
IBA lifesciences(德國):IBA公司總部位于德國。二十年來,IBA以杰出的專利技術Strep-tag?系統(tǒng)為基礎,發(fā)展出完整的產品組合,涵蓋重組蛋白表達丶純化與固定以及特定細胞從全血或相關體液中分離的技術。同時,IBA也是全球領先的核酸合成專家,在DNA及RNA寡核苷酸的合成上已有超過二十年的經驗,能根據客戶的選擇,生產含有特定染料或化學修飾的特殊寡核苷酸。