昨天,小達君為大家帶來了抗體純化用IBA新品—Protein A Agarose,今天我們繼續來說說蛋白表達純化那點事兒。
通常,我們會利用融合標簽與目的蛋白的融合表達實現某些實驗目的,例如,蛋白純化(Strep-tag、His)、增強蛋白的可溶性(MBP、GST)、增加蛋白的表達量(Flag、GST)、報告目的蛋白表達情況(GFP)等。但是,當融合標簽完成了它的使命,又會影響下游的某些實驗時,例如免疫動物、影響目的蛋白活性,我們就需要考慮如何將其去除。小達君為您推薦一款去除融合標簽的利器——Lucigen的SelecTEV? Protease,簡單的實驗操作即可得到較純的目的蛋白。
SelecTEV?蛋白酶是一種基因工程改造的煙草蝕刻病毒(TEV)蛋白酶,通過His標簽的親和層析從大腸桿菌中純化,SDS-PAGE分析表明其純度為90%。SelecTEV?蛋白酶能夠識別Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七個氨基酸以及與其密切相關的序列,并在Gln和Gly殘基之間進行切割。 這七種氨基酸序列在蛋白質中很少見,使得SelecTEV?蛋白酶成為從融合蛋白中去除標簽的理想選擇。利用蛋白酶N-末端的His標簽通過親和層析即可從酶切反應中除去SelecTEV?蛋白酶。
產品特點:
經過基因工程改造,與天然蛋白酶相比具有更高的特異性,活性和穩定性;
帶有His標簽(六個組氨酸),更易于去除;
1unit SelecTEV?蛋白酶在30°C下、1h內可以切割≥85%的3μg對照底物;
SelecTEV?蛋白酶最佳切割溫度30°C,但在很寬的溫度(4 - 30°C)和pH(6.0 - 8.5)范圍內有效,以適應您的特定蛋白質。
實驗流程如下:
酶切反應完成后,用標簽特異性純化柱去除融合標簽,收集流穿液。為去除流穿液中的TEV蛋白酶,利用鎳柱進行二次純化,得到的流穿液中的蛋白即為純的目的蛋白。
產品信息:
產品名稱 |
貨號 |
規格 |
品牌 |
目錄價 |
SelecTEV? Protease |
30810-1 |
1,000 U |
Lucigen |
¥1,834 |
30810-2 |
5,000 U |
Lucigen |
¥8,008 |
Lucigen公司成立于1998年,提供各類用于分子生物學研究相關產品,可以使研究者成功克隆較難克隆的基因。2016年Lucigen收購了Illumina旗下Epicentre產品線,2018年又被英國LGC公司收購。目前產品線主要包括:體外轉錄、基因克隆(BAC克隆試劑盒)、感受態細胞(TG1噬菌體文庫構建感受態)、體外擴增、轉座子突變、蛋白表達、核酸提取等。