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【流式學習】一起聊聊PNH和FLAER的故事

作者:admin信息來源:達科為日期:2019年08月01日打印字體:  
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陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)它是由1個或幾個造血干細胞上PIG-A基因突變造成的非惡性的克隆性疾病,PIG-A突變造成糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)合成異常,進而導致由GPI錨連在細胞膜上的一組膜蛋白丟失。臨床主要表現為溶血性貧血、骨髓衰竭、平滑肌張力障礙和血栓的形成。

國際PNH興趣小組將PNH分為以下三類

  • 經典型PNH:該患者有典型的溶血和血栓形成;

  • 合并其他骨髓衰竭性疾病:如再生性貧血(AA)或骨髓增生異常綜合征 (MDS);

  • 亞臨床型PNH:患者有輕微的PNH克隆,但沒有溶血和血栓臨床證據。

目前對PNH的診斷和檢測主要是通過流式細胞術分析CD55和CD59在紅細胞和粒細胞上的缺失情況來判斷,但CD55、CD59等補體調節蛋白的表達還會受到其它因素的影響, 如MDS、細胞發育不全等均有可能導致膜蛋白的缺失,因此僅檢測CD55和CD59有一定的局限性,且容易出現誤診。

隨著研究的深入,人們發現FLAER可以有效的提高檢測準確率。FLAER是Alexa-488標記無活性的嗜水氣單胞菌溶素前體的變異體,可以特異性地與GPI錨連蛋白結合,與普通氣單胞菌溶素相比,不會引起細胞溶血,并能有效的把PNH細胞(GPI-)和正常細胞(GPI+)區分開來。但由于紅細胞表面某些糖蛋白的存在使FLAER不能很好的與錨蛋白結合, FLAER分析法一般只用于粒細胞和單核細胞的檢測。

 圖:取新鮮PNH病人外周血裂紅后用FLAER染色,分析單核細胞、粒細胞中的PNH克隆數 [1]
有文獻報道了[2]536例疑似PNH患者FLAER分析法與傳統流式分析法對比結果,發現FLAER分析法63例患者檢測到PNH克隆,檢出率11.8%并且克隆數都較大。而傳統分析法只有33例患者檢測出PNH克隆,檢出率6.2%并且檢測的克隆較小。FLAER檢測微小的PNH克隆更加敏感,且不受輸血溶血的影響。常規僅可以檢測出1%的PNH細胞,而FLAER可以檢測出遠小于<1%PNH細胞[3]。

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參考文獻
  • Keeney M, Illingworth A,Sutherland DR ,etc. Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Assessment by FlowCytometric Analysis Clin Lab Med. 2017 Dec;37(4):855-867. 

  • Sutherland DR, Kuek N, Azcona-Olivera J,etc. Use of a FLAER-based WBC assay in the primary screening of PNH clones. Am J Clin Pathol. 2009 Oct;132(4):564-72. 

  • Illingworth AJ, Marinov I, Sutherland DR.Senstive andaccurate identification of PNH clones based on ICCS/ESCCA PNH ConsensusGuidelines-A summary. nt J Lab Hematol. 2019May;41 


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