細(xì)胞分離可以通過物理或者免疫磁珠的方法去除不感興趣的細(xì)胞，有助于目的細(xì)胞的富集并去除死細(xì)胞。密度梯度離心法是最常用的方法富集感興趣的細(xì)胞，原理是根據(jù)細(xì)胞在介質(zhì)中的沉降系數(shù)進(jìn)行分離，特定密度的細(xì)胞可以在密度梯度介質(zhì)中被輕松分離。Serumwerk Bernburg是專門的生產(chǎn)商和服務(wù)商，為廣大科研和臨床工作者提供一系列碘化物的密度梯度分離液包括：即用型、多功能型分離液，產(chǎn)品符合GMP標(biāo)準(zhǔn)，具有安全無毒、低滲透性和分離純化效果好等特點(diǎn)。

多形核粒細(xì)胞(PMNs)，主要是中性粒細(xì)胞，同時(shí)包括少量嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。Polymorphprep分離液的高滲透壓可使紅細(xì)胞失水而縮小，從而增大紅細(xì)胞的有效浮力密度，同時(shí)分離液中的葡蔗糖能促使紅細(xì)胞聚集并在溶液中快速沉降，隨著離心過程紅細(xì)胞會(huì)被逐漸沉降到底部，所以利用Polymorphprep分離液可以快速有效的同時(shí)獲得PMNs和PBMC細(xì)胞。

具體的實(shí)驗(yàn)流程如下：

1、為了達(dá)到最好的效果，使用抗凝全血，如EDTA，肝素或檸檬酸。EDTA 抗凝效果最佳。

2、將5毫升血液+ 5毫升分離液放入15毫升試管中，下層是分離液上層是血液。

3、500-550g室溫離心30分鐘，離心速度緩升緩降，升2檔降2檔。

4、離心后，可以看到兩圈白膜層。上面PBMCs，下層是PMNs，小心吸取PMN。

5、為使PMNs恢復(fù)正常滲透壓，可以加入等體積的0.45% NaCl溶液或0.5體積正常濃度的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋。

6 、將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到一個(gè)15ml的試管中，加入2ml PBS, 400 g離心10分鐘(18-22°C)，也可以被重懸在培養(yǎng)基中完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1）該分離液僅適用于人的未作稀釋的血液，不適用于動(dòng)物血液。

2）建議使用兩小時(shí)內(nèi)的新鮮血液，待分離血液和待用分離液的溫度需要保持在18度-22度之間。

3）注意離心時(shí)間越長(zhǎng)或離心力越大，會(huì)導(dǎo)致PMN進(jìn)一步向紅細(xì)胞處遷移。

4）這里使用15ml離心管，推薦用5 ml血液+ 5 ml分離液進(jìn)行密度梯度離心，若使用50ml離心管，建議使用 18 ml 血液+18 ml Polymorphprep?。

Serumwerk Bernburg成立于1954年，是一家現(xiàn)代化的生產(chǎn)商和服務(wù)商。2021年6月1日起，Serumwerk Bernburg AG公司從雅培診斷收購(gòu)了密度梯度分離液產(chǎn)品線。并授權(quán)達(dá)科為是中國(guó)獨(dú)家代理商。分離液系列產(chǎn)品不僅可以分離多種種屬，如人、靈長(zhǎng)類、嚙齒類、兔、反芻動(dòng)物等來源的多種細(xì)胞、亞細(xì)胞器，還可以分離純化膜囊泡、病毒、蛋白質(zhì)，核酸等物質(zhì)。分離液產(chǎn)品生產(chǎn)、包裝、發(fā)布嚴(yán)格按照GMP和ISO13485標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

公司網(wǎng)址：https://diagnostic.serumwerk.com/

達(dá)科為可以提供Serumwerk Bernburg AG的全系列分離液產(chǎn)品，產(chǎn)品信息如下圖所示：