為讓您的流式實驗更完善,結果更客觀理想,現列出實驗所需的全套緩沖液:
420201 Cell Staining Buffer 是流式實驗全程通用緩沖液,含有小牛血清,可降低抗體和熒光素的非特異性結合;含有細胞代謝抑制劑NaN3,可防止表面抗原的覆蓋。
胞內染色實驗中,在標本活化的后期加入阻斷劑(蛋白運輸抑制劑)通常比較重要,能夠防止胞內因子分泌到胞外。可根據標本的種類選擇不同的阻斷劑。
420301 RBC Lysis Buffer (10X) 是一款用于裂解小鼠脾臟和人外周血中紅細胞的裂紅液。很溫和,對白細胞的影響很小。但對有核的紅細胞沒有裂解作用。
422401 RBC Lysis/Fixation Solution (10X) 是一款適用于人全血標本染色的裂紅液,含有固定劑的成分,在裂解紅細胞的同時對白細胞有固定作用。
某些細胞表面表達 Fc 受體,可與免疫球蛋白(抗體)的 Fc 段發生結合,該結合對于抗原-抗體的特異性結合而言,是非特異性的,從而導致了背景的增加,甚至是假陽性。因此對于檢測這些細胞的表面標志時,封閉抗體與 Fc 受體的結合是必須的。通常表達 Fc 受體的細胞有 B 細胞、濾泡性 DC、 NK 細胞、單核/巨噬細胞、粒細胞、肥大細胞等。
注意:422301 TruStain FcX? (Human) 并不影響 anti-human CD16 (clone 3G8), anti-human CD32 (clone FUN-2) 和 anti-human CD64 (clone 10.1) 與抗原的結合。
如果您要檢測胞漿內的分子(如細胞因子),請使用以下固定破膜劑:
如果您要檢測核內的分子,請使用以下固定破膜劑(注意:某些核內抗原需要70% Ethanol 固定破膜,具體方法請見說明書):
有時實驗結束后需要延遲一段時間才能上機,或者實驗需要中斷,此時需要相應的 Buffer 來維持指標的穩定性:
422101 FluoroFix? Buffer 適用于任何 Protocol 中的固定步驟,因比其他款固定劑溫和,尤其適用于耦合熒光素的固定。標本固定后,可以在 Cell Staining Buffer (Cat#:420201) 中4度避光保存兩天。
422501 Cyto-Last? Buffer 適用于分泌胞內因子細胞的儲存。胞內實驗固定之后,標本重懸在此 Buffer 中,4度避光可保存2周!