大家對小達君上周介紹的Denovo FCS Express6的入門篇(上)是否還有印象?今天,小達君給大家介紹軟件的入門知識中篇,請結合入門篇上篇學習喲。
在入門篇上篇中,我們分享了軟件的版面知識,數據的添加,圈門,座標軸標簽的改動等功能,那么本期將給將給大家介紹補償的調節及應用,包括手動調補償及自動調補償,實驗數據的統計及一些實用的小技巧。
1. 手動脫機調補償及自動調補償
A. 手動調補償(一般在僅有樣本管或者自動調補償后微調時使用)
打開軟件,插入一個數據(示例中為彩點圖),當插入一個圖形后,如需更換數據的顯示方式,如想將彩點圖更換為其它圖形(如密度圖等),可選中該圖形,直接按照下述步驟更改。
圈中目的細胞群,拖至空白處形成一個新的圖形,并根據需要改動橫縱坐標軸的參數。本示例中以FITC和PE為例,調節此兩通道之間的補償。下圖所示,補償未經過調節,FITC與PE之間有補償。
此時可以手動調節兩通道之間的補償,該數據為FITC單管,可用PE-FITC調節FITC滲漏到PE通道去的熒光。步驟如下圖所示:
出現補償編輯欄,從PE通道中去除FITC的熒光信號,使PE通道的Mean/Median值與陰性細胞群一致。
點擊OK,則FITC滲漏到PE通道的熒光被扣除。
B. 自動調補償(需要陰性管及各單陽管)
打開軟件,按照下述步驟操作。
建立直方圖后,在原本的版面Page 1后面出現Scatter Plot及其它各個單管的Control界面。
接著,在Scatter Plot版面中,將門的位置移至正確的細胞群所在的位置,如下圖所示。
如所示的方形門不能正確的圈出細胞群,可按以下步驟將該門改變為自由形門等。
圈好門之后,選中單管Control版面,按照陰性細胞與陽性細胞的位置調整Marker門的位置。
依次調整好各單管Control的Marker門的位置。此處不一一列舉。回到補償界面。此處的3、4適用于使用補償beads調節補償的情況(由于本次數據為細胞,此處不詳細列出,如對此步驟感興趣,可咨詢小達君)
則自動調補償就完成了。補償矩陣及溢出矩陣就出現在補償欄中。
此時,可點擊保存將此補償下來,以便下次使用。回到Page 1,當添加一個未經過補償調節的數據時,將該補償拖過去,則該補償矩陣就被應用到數據中。
或者通過右鍵-Format-Overlay-Compension將補償應用到該數據中。如下圖所示:
2. 實驗數據的統計
選擇右鍵-Statistics,可添加門數據及十字門象限數據。
本期就先介紹到這里,大家是不是對Denovo軟件有了更進一步的認識?我們會陸續推出Denovo軟件的功能介紹及流式數據分析的技巧,感興趣的同學可以下載試用哦。
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